1　實驗部分
1.1　主要儀器與試劑
      黃曲霉毒素測定儀：ALC10型，配有輸液泵、WorkingStation數(shù)據(jù)庫版工作站，濟南海能儀器股份有限公司；
      甲醇中黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液：1.96g／mL，擴展不確定度為0.09g／mL(k=2)，編號為GBW(E)100302，國家糧食局科學(xué)研究院；
      甲醇、乙腈：色譜純，賽默飛世爾科技(中國)有限公司；數(shù)字溫度計：測量范圍為0～100℃，最大允許誤差為0.3℃，合肥常宏測控技術(shù)有限責(zé)任公司；
      分析天平：感量為0.1mg，上海天平儀器廠；
      秒表：最小分度值不大于0.1s，上海秒表廠；
      注射器：100L，1mL和10mL注射器各一支，北京玻璃儀器集團公司；
      容量瓶：10mL容量瓶若干，北京玻璃儀器集團公司；
      上述設(shè)備應(yīng)具備有效期內(nèi)的檢定證書。
 
1.2　環(huán)境條件
      環(huán)境溫度為：15～30℃；相對濕度為：20%～80%；供壓電源：電壓為(22022)V，頻率為(501)Hz；儀器應(yīng)平穩(wěn)地放在工作臺上，周圍應(yīng)無強烈機械震動，無強電磁場干擾，且儀器接地良好。
 
1.3　系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制
      用流動相為68%A相（水）32%B相（體積比為1∶1的乙腈甲醇）稀釋甲醇中AFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成AFB1系列標(biāo)準(zhǔn)工作液,質(zhì)量濃度依次為0.1，0.5，2，5，10，20，40ng／mL。
 
1.4　色譜條件
      色譜柱：C18色譜柱(150mm、4.6mm，5m，美國安捷倫科技有限公司)；
      柱溫：40℃(溫差控制范圍為2℃)；
      柱流量：1.0mL／min；
      進樣體積：50L定量環(huán)滿環(huán)進樣；
      時間常數(shù)：高；檢測波長：激發(fā)波長為360nm，發(fā)射波長為440nm；
      動態(tài)基線漂移及長期噪聲的基線測試用流動相為甲醇；其余校準(zhǔn)項目的流動相：A相為水，B相為乙腈甲醇(體積比為1∶1)，等梯度洗脫：68%A32%B。
 
1.5　校準(zhǔn)項目和校準(zhǔn)方法
1.5.1　通用技術(shù)要求
      按照相關(guān)通用技術(shù)要求，對儀器標(biāo)牌上名稱、型號、制造廠名、出廠編號、生產(chǎn)日期、制造計量器具許可證計編號等內(nèi)容的標(biāo)識進行逐項檢查。儀器外觀不應(yīng)存在妨礙正常工作的機械損傷；樣品池及液路無泄漏；儀器電源線、信號線等插接緊密，各開關(guān)、旋鈕、按鍵等功能正常；指示燈靈敏，顯示器清晰；儀器在不工作的狀態(tài)下，當(dāng)試驗電壓為500V時，電源插頭的相線與儀器機殼外露金屬部分之間的絕緣電阻應(yīng)不小于20MΩ。
 
1.5.2　動態(tài)基線漂移及長期基線噪聲
      選用C18色譜柱，以100%甲醇為流動相，流量為1.0mL／min，設(shè)置儀器參數(shù)后平衡系統(tǒng)，待系統(tǒng)穩(wěn)定后開始記錄基線1h。用1h內(nèi)基線偏離起始點最大響應(yīng)信號值(counts／h)作為該檢測器動態(tài)基線漂移，即以1h偏離起始點最大信號值與起始點之差作為該儀器的動態(tài)基線漂移值，如圖1所示。在以上1h基線范圍內(nèi)選取所記錄基線中噪聲較大的30min作為計算長期噪聲的基線，使用30min范圍內(nèi)的所有數(shù)據(jù)點計算出線性回歸方程。將給定時間范圍內(nèi)所有數(shù)據(jù)點減去線性回歸線，獲得漂移修正信號。然后按式(1)計算動態(tài)長期峰到峰噪聲，即所選30min范圍漂移最大值與最小值之差作為該檢測器的長期基線噪聲值。(亦可參考通過色譜系統(tǒng)軟件直接計算PP噪聲)。
Nd=ImaxImin   (1)
式中：
Nd長期基線噪聲；
Imax選定的30min范圍內(nèi)漂移修正信號的最高峰；
Imin選定的30min范圍內(nèi)漂移修正信號的最低峰。
 
1.5.3　線性相關(guān)系數(shù)
      按1.4色譜條件運行，待壓力、基線穩(wěn)定后，利用手動進樣的方式，用50L定量環(huán)(滿環(huán)進樣)由低濃度到高濃度依次進樣測定1.3中配制的AFB1系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄色譜圖。重復(fù)測量3次色譜峰面積，取算術(shù)平均值，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)、以AFB1的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)進行線性回歸，計算標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程和線性相關(guān)系數(shù)r。
 
1.5.4　最小檢測濃度
      最小檢測濃度是指檢測器恰能產(chǎn)生與噪聲相區(qū)別的響應(yīng)信號時所需的最小進樣量，是表征儀器極限檢測能力的重要指標(biāo)，常用濃度(或質(zhì)量)表示。被測量儀器的最小檢測濃度則表示該儀器的檢測能力與極限，其值越小表明該儀器檢測能力越強。按1.4色譜條件運行，待壓力、基線穩(wěn)定后，用100L微量注射器進樣測定0.1ng／mL的AFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液，采集色譜圖，并記錄色譜圖中AFB1的色譜峰高和基線噪聲峰高，按式(2)計算最小檢測濃度：
cL=2NdcV／(50H)   (2)
式中：
cL最小檢測濃度，ng／mL；
Nd基線噪聲峰高；
cAFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，ng／mL；
V進樣體積，L；
H色譜圖中AFB1的色譜峰高；
50標(biāo)準(zhǔn)的定量進樣體積，L。
 
1.5.5　定性、定量重復(fù)性
      按1.4色譜條件運行，待壓力、基線穩(wěn)定后，用100L微量注射器進樣測定2.0ng／mL的AFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄色譜圖，重復(fù)測量7次。將色譜圖測試數(shù)據(jù)中的保留時間和峰面積分別代入公式(3)計算儀器的定性、定量重復(fù)性：
 
式中：
RSD測量重復(fù)性相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，%；
Xi保留時間(或峰面積)第i次測得的測量結(jié)果；
X保留時間(或峰面積)n次測量結(jié)果的算術(shù)平均值；
n測量次數(shù)，n=7。

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